A Dnmt3b DNS metiltranszferáz tetraciklinnel szabályozott túltermelésének hatása transzgénikus egerekben
Title in English
The effect of tetracycline regulated overexpession of Dnmt3b methyltransferase in transgenic mice
Panel
Genetics, Genomics, Bioinformatics and Systems Biology
Department or equivalent
Agricultural Biotechnology Institute (ABC) (National Agricultural Research and Innovation Centre)
Starting date
2005-01-01
Closing date
2007-12-31
Funding (in million HUF)
5.050
FTE (full time equivalent)
1.65
state
closed project
Final report
Results in Hungarian
Kísérleteim során a Dnmt3b DNS metiltranszferázt próbáltam túltermeltetni transzgénikus egérmodellben. A túltermelést szabályozott módon, tetraciklin regulációval, illetve a megfelelő Dnmt3b funkcionális mRNS szabályozott időpontban történő mikroinjektálásával próbáltam elérni. A gén megjelenésének időpontját úgy választottam meg, hogy az lehetőség szerint megzavarja a korai embrionális korban történő metilációs mintázat kialakulását. A kísérletekben a Dnmt3b nem tartalmazta az un. CPE motívumot, így lehetősége van a fehérjének közvetlenül hatni a korai embrionális korban is. A létrehozott transzgénikus egér szabályozott módon, de nagyon alacsony mértékben expresszálta a transzgént. Így nem volt kimutatható szerepe a DNS metilációra sem globális szinten, sem a H19 és Snrpn gének esetében. A mikroinjektált RNS esetében sem sikerült a kis szatellit szekvenciák metiláltságában különbséget találni, azonban a H19 gén megfelelő régiójában enyhe hipermetiláció alakult ki a felnőtt állatok májában.
Results in English
In my experiments I tried to overexpress the human Dnmt3b DNA methyltransferase in transgenic mouse models. Overexpression was regulated by tetracyclin or by the perfect microinjection timing of functional Dnmt3b mRNA. The temporary appearance of gene expression was formed due to disturb the developing methylation pattern in the early embryonic stages. The nucleic acid constructs created do not contain the special CPE motifs so the recombinant protein can directly act in the early embryonic stages. The transgenic mouse line generated expresses the transgene in a regulated way but expression was extremely weak. We could not show any DNA hypermethylation not at global genomic level nor in the cases of H19 and Snrpn genes. The specially microinjected RNA did not changed the methylation status of centromeric minor satellite sequences, but slight hypermethylation occurred in H19 DMR region of the liver DNA.
A kutatás helye megváltozott. Korábbi kutatóhely: (Nemzeti Agrárkutatási és Innovációs Központ), Új kutatóhely: Mezőgazdasági Biotechnológiai Kutatóintézet (Nemzeti Agrárkutatási és Innovációs Központ).
