Enzimspecifitás megváltoztatása in vitro evolúciós stratégiával
Title in English
Alteration of enzyme specificity by a strategy based on in vitro evolution
Panel
Genetics, Genomics, Bioinformatics and Systems Biology
Department or equivalent
Institute of Biochemistry (HUN-REN Biological Research Centre Szeged)
Participants
Tímár, Edit
Starting date
2005-01-01
Closing date
2006-12-31
Funding (in million HUF)
4.750
FTE (full time equivalent)
3.00
state
closed project
Final report
Results in Hungarian
A kutatás célja előző – hasonló című – pályázatunk, amelyben is vitro mesterséges evolúcióval előállítottunk egy megváltozott specifitású DNS-modifikációs metiláz enzimet, kiegészítése és lezárása volt. Elért eredményeink a következőkben foglalhatók össze:
1. Előállítottuk és részlegesen jellemeztük két újabb, szintén megváltozott specifitású mutánsát a korábban vizsgált M.SinI enzimnek.
2. Előállítottuk és részlegesen jellemeztük az M.SinI enzimnek és egyik megváltozott specifitású mutánsának az N-terminális régió első 65 aminosavától megfosztott, rövidített változatát, amelyek működőképesek voltak.
3. Újszerű, az irodalomban egyedülálló, kisérleti rendszert dolgoztunk ki az M.SinI enzim kívánt irányú specifitásváltozásának in vivo detektálására és jellemzésére.
Results in English
This was the extension and continuation of the work done during our previous OTKA project (with the same title), in which we constructed, by using in vitro directed evolution techniques, a mutant DNA-modification enzyme with changed recognition specificity.
The results of the present work could be summarized as follows:
1. By applying the same methods, we constructed two different new mutant variants of the previously studied M.SinI enzyme, with similarly changed recognition specificities, and partially characterized them.
2. We constructed and partially characterized truncated versions of the wild-type and one mutant variant of the M.SinI enzyme, without the N-terminal first 65 amino acids. These truncated enzymes preserved their enzymatic activity.
3. We developed an entirely new experimental system, for the in vivo detection and semiquantitative measurement of the changed recognition specificity of the studied M.SinI enzyme.
