Total synthesis of proteins for structural and functional studies  Page description

Help  Print 
Back »
 

Details of project

  
Identifier
49222
Type F
Principal investigator Tömböly, Csaba
Title in Hungarian Fehérjék előállítása kémiai módszerekkel szerkezeti és funkcionális vizsgálatok céljára
Title in English Total synthesis of proteins for structural and functional studies
Panel Chemistry 2
Department or equivalent Institute of Biochemistry (HUN-REN Biological Research Centre Szeged)
Starting date 2005-01-01
Closing date 2008-12-31
Funding (in million HUF) 4.606
FTE (full time equivalent) 3.20
state closed project





 

Final report

  
Results in Hungarian
Szerkezeti és funkcionális vizsgálatokhoz szükséges specifikusan módosított fehérjék előállítására alkalmas lépésenkénti natív kémiai ligációt értem el két rekombináns fehérje és egy szintetikus, biotinnal jelzett peptid kapcsolásával. Az N-terminális reaktív csoport (Cys) átmenti védelmére Met-Met dipeptidet alkalmaztam, amelyet a következő ligációs reakció előtt enzimatikus úton, mutáns metionin aminopeptidáz enzimmel távolítottam el. A félszintetikus trimer terméket sztreptavidin affinitáskromatográfia segítségével izoláltam. A prion fehérje sejtmembránhoz horgonyzásához alkalmas koleszterin-trisz-etilén-glikol származékot állítottam elő. Konfokális mikroszkópiás vizsgálatok rámutattak, hogy a fluoreszceinnel jelzett koleszterin-trisz-etilén-glikol származék stabilan beágyazódik a liposzóma membránba, ami fuzionáltatható egér Zpl idegsejtekkel. Vagyis a horgonymimetikum alkalmas fehérjék sejtmembránhoz horgonyzására.
Results in English
The structural and functional investigation of proteins requires specific protein derivatives. A consecutive native chemical ligation method was developed for the preparation of such unique molecules, and the ligation of two recombinant protein and one synthetic biotinylated peptide was achieved. For the temporary protection of the N-terminal reactive group (Cys), the dipeptide Met-Met was applied, that was enzymatically removed before the next ligation step by a mutant methionine aminopeptidase. The semisynthetic trimeric prduct was isolated by streptavidin affinity chromatography. A tris(ethylene glycol) derivative of cholesterol was prepared to investigate its possible application for the membrane anchoring of the prion protein. Confocal microscopic studies revealed that the fluorescent labeled cholesterol derivative associates effectively with liposome membranes, and this labeled liposomes can be fused to mouse neuronal cell lines. Thus, the amphipathic cholesterol molecule is presumably appropriate for the membrane anchoring of the prion protein.
Full text http://real.mtak.hu/1941/
Decision
Yes





 

List of publications

  
Cox, V., Clarke, S., Czyzyk, T., Ansonoff, M., Nitsche, J., Hsu, M-S., Borsodi, A., Tömböly, Cs., Tóth, G., Hill, R., Pintar, J., Kitchen, I.: Autoradiography in opioid triple knock out mice reveals opioid receptor like binding of naloxone benzoylhydrazone., Neuropharmacology 48: 228-235, 2005
Ioja, E., Tóth, G., Benyhe, S., Tourwé, D., Péter, A., Tömböly, Cs., Borsodi, A.: Opioid receptor binding characteristics and structure-activity studies of novel tetrapeptides in the TIPP (Tyr-Tic-Phe-Phe) series., Neurosignals 14: 317-328, 2005
Van Rompaey, K., Ballet, S., Tömböly, Cs., De Wachter, R., Vanommeslaeghe, K., Biesemans, M., Willem, R., Tourwé, D.: Synthesis and evaluation of the β-turn properties of 4-amino-1,2,4,5-tetrahydro-2-benzazepin-3-ones and of their spirocyclic derivative., Eur. J. Org. Chem. 13: 2899-2911, 2006
Botros, M., Hallberg, M., Johansson, T., Zhou, Q., Lindeberg, G., Frändberg, P-A., Tömböly, Cs., Tóth, G., Le Grevès, P., Nyberg, F.: Endomorphin-1 and endomorphin-2 differentially interact with specific binding sites for substance P (SP) aminoterminal SP1–7 in the rat spinal cord., Peptides 27: 753-759, 2006
Tömböly, Cs., Tóth, G., Welker, E.: Maltóz-kötő fehérje módosítása kémiai ligációval., A Peptidkémiai Munkabizottság tudományos ülése, Balatonszemes, 2006. máj. 29-31., 2006
Tömböly, Cs., Feytens, D., Tóth, G., Benyhe, S., Borsodi, A., Tourwé, D.: Design and synthesis of 4-amino-1,2,4,5-tetrahydro-2-benzazepine-3-one containing endomorphin-2 mimetics., pp 123-124 in 2nd International Congress Natural Peptides to Drugs, 18-21 April 2006, Zermatt, Switzerland, 2006
Tóth, G., Ioja, E., Tömböly, Cs., Ballet, S., Tourwé, D., Péter, A., Martinek, T., Chung, N.N., Schiller, P.W., Benyhe, S., Borsodi, A.: B-Methyl substitution of cyclohexylalanine in Dmt-Tic-Cha-Phe peptides results in highly potent d opioid antagonists., J. Med. Chem. 50: 328-333, 2007
Tömböly, Cs., Welker, E.: Toward an improved protein ligation method for consecutive coupling of protein fragments, 32nd FEBS Congress, 2007
Ballet, S., De Wachter, R., van Rompaey, K., Tömböly, Cs., Feytens, D., Tóth, G., Quartara, L., Cucchi, P., Meini, S., Tourwé, D.: Bradykinin analogs containing the 4-amino-2-benzazepin-3-one scaffold at the C-terminus, J. Pept. Sci. 13: 164-170, 2007
Keresztes, A., Szűcs, M., Borics, A., E. Kövér, K., Forró, E., Fülöp, F., Tömböly, Cs., Péter, A., Páhi, A., Fábián, G., Murányi, M., Tóth, G.: New endomorphin analogues containing alicyclic beta-amino acids: influence on bioactive conformation and pharmacological profile, J. Med. Chem. 51: 4270-4279, 2008
Botros, M., Johansson, T., Zhou, Q., Lindeberg, G., Tömböly, Cs., Tóth, G., Le Grevès, P., Nyberg, F., Hallberg, M.: Endomorphins interact with the substance P (SP) aminoterminal SP(1-7) binding in the ventral tegmental area of the rat brain, Peptides 29: 1820-1824, 2008
Tömböly, Cs., Welker, E.: Improved expressed protein ligation method for consecutive coupling of polypeptide fragments, J. Pept. Sci. 14 S1: 183, 2008
Tömböly, Cs., Welker, E.: Improved expressed protein ligation method for consecutive coupling of polypeptide fragments, Peptides 2008, 2008
Tömböly, Cs., Ballet, S., Feytens, D., E. Kövér, K., Borics, A., Lovas, S., Al-Khrasani, M., Fürst, Zs., Tóth, G., Benyhe, S., Tourwé, D.: Endomorphin-2 with a β-turn backbone constraint retains the potent μ opioid receptor agonist properties, J. Med. Chem. 51: 173-177, 2008



Back »