Haematology, immunology, thrombosis, infectious diseases (Council of Medical and Biological Sciences)
90 %
Ortelius classification: Haematology
Public health, health services, environmental and occupational medicine, epidemiology, medical ethics
(Council of Medical and Biological Sciences)
10 %
Ortelius classification: Haematology
Panel
Clinical Medicine
Department or equivalent
Department of Laboratory Medicine, Division of Clinical Laboratory Science (University of Debrecen)
Participants
Bagoly, Zsuzsa Bereczky, Zsuzsanna Boda, Zoltán Fazakas, Ferenc Hársfalvi, Jolán Ilonczai, Péter Katona, Éva Kerényi, Adrienne Kiss, Csongor Komáromi, István Kovács, Emese Gyöngyvér Pfliegler, György Schlammadinger, Ágota Tóth, László
Starting date
2009-04-01
Closing date
2013-03-31
Funding (in million HUF)
39.244
FTE (full time equivalent)
10.58
state
closed project
Summary in Hungarian
A pályázatban a Központunkban már korábban diagnosztizált, ill. a projekt időtartama alatt diagnosztizálandó vérzékenységgel járó ritka betegségek (rare bleeding disorder=RBD) tudományos vizsgálatát tervezzük. A betegek első csoportjában, a még nem ismert kóros fehérje és/vagy a betegségért felelős mutáció azonosítására kerül sor (thromboxane A2 szignalizációs defektus, Glanzmann thrombasthenia, ADP receptor defektus, faktor XIII deficiencia). Ezekben az esetekben ill. azokban, ahol a genetikai diagnózis már ismert (faktor V és faktor VII deficienciák) elvégezzük a mutációk következményeinek mRNS és fehérje szintű analízisét. A vizsgálatok magukban foglalják a mutáns fehérjék expresszióját emlős sejtekben, intracelluláris eloszlásuk és érésük vizsgálatát, degradációjuk és szekréciós kapacitásuk megismerését. A mutációk strukturális-funkcionális következményeit molekula modellezéssel és modern biokémiai módszerekkel is vizsgáljuk. A project célja: - új ismeretek szerzése az egyes RBD-k fenotípusáról és genotípusáról, és a fenotípus-genotípus összefüggésekről, - az RBD-k területén új tapasztalat szerzésével elősegíteni pontos diagnosztikai és korrekt terápiás eljárások kialakítását, - új információk felismerése az RBD-k pathogenezisével és pathomechanizmusával kapcsolatban, - új ismeretek szerzése az RBD-kben szerepet játszó fehérjék tulajdonságaival (struktúra, funkció, intracelluláris eloszlás, szekréció és degradáció) kapcsolatosan.
Summary
Rare bleeding disorders (RBDs) already diagnosed in our Center and RBDs that will be diagnosed during the time span of the project are planned to be involved in the study. In the first group of patients, if not known, the defect protein and/or the causative mutation will be identified (patient with thromboxane A2 signalization defect, Glanzmann thrombasthenia, ADP receptor defect, factor XIII deficiency). These cases, and cases with already established molecular genetic diagnosis (factor V and factor VII deficiencies) will be analyzed to explore the consequences of the mutations at mRNA and protein level. Investigations will include expression of mutant proteins in mammalian cells, monitoring their intracellular trafficking, degradation and their ability/inability to get secreted. The structural-functional alterations introduced by the mutation will also be tested by molecular modeling and sophisticated biochemical techniques. The aim of the project is: - to obtain new pieces of information on the phenotypic and genetic features of individual RBDs and to study phenotype-genotype interrelations, - by gaining more experience with RBDs to promote their diagnosis and therapy, - to provide new information on the pathogenesis and pathomechanism of RBDs, - to extend the knowledge on the structure, function, intracellular trafficking, secretion and degradation of proteins involved in RBDs.
Final report
Results in Hungarian
1. Új heterozigóta formában vérzékenységet okozó V-ös faktor (FV) mutáció felfedezése és strukturális következményeinek leírása.
2. Új irányelvek és algoritmus kidolgozása a XIII-as faktor (FXIII) diagnosztikájára.
3. Két gyermeknél súlyos vérzékenységet okozó új FXIII A alegység mutációk (c.1112+2T>C és c.215 delA) leírása, a laboratóriumi és klinikai tünetek elemzésével.
4. A trombociták specifikus mRNA koncentrációjának meghatározására használható referencia gének megállapítása.
5. FXIII aktivitás meghatározás módosítása, érzékenyebbé tétele.
6. Két új FX mutáció (p.T272M és p.W347L) okozta súlyos vérzékenységben szenvedő kettős heterozigóta beteg elemzése. A mutáns fehérjék expressziója emlős sejtben, a kóros faktorok sejten belüli sorsának elemzése és a mutációk okozta szerkezeti változások felderítése.
7. Új módszer kidolgozása a P2Y12 ADP receptor út tesztelésére, (A módszer. a clopidogrel terápia monitorozására is alkalmas.)
8. Új módszer kidolgozása a tromboxán A2 képződésért felelős útvonal tesztelésére.
9. A glikoprotein IIIa-t kódoló génben új, a citoplazmatikus régió trunkációját eredményező p.Arg724Stop mutáció okozta variáns Glanzmann thrombasthenia leírása, és e mutáció prenatális diagnosztikája.
10. Algoritmus kidolgozása antitrombin (AT) deficienciák diagnosztikájára.
11. A heparin kötő hely defektusa által okozott AT deficienciát csak az aktív X-es faktor gátlásán alapuló teszt mutatja ki megbízhatóan (a trombin gátláson alapuló teszt nem).
Results in English
1. Description of a novel factor V (FV) mutation and its structural consequences that causes bleeding diathesis in heterozygous form.
2. Construction of new guideline and algorithm for the diagnosis of FXIII deficiency.
3. Description of two novel FXIII A subunit gene mutations in (c.1112+2T>C, c.215 delA) in two severe bleeders. Analysis of clinical and laboratory data.
4. Establishment of reference genes for the determination of specific mRNA in platelets.
5. Modification of FXIII activity assay to increase its sensitivity.
6. Clinical and laboratory analysis of a severe FX deficiency case caused by two novel mutations (p.T272M és p.W347L). Expression of mutant proteins in mammalian cells, monitoring their intracellular fate. Elaboration of changes in the protein structure.
7. Development of new method for testing the P2Y12 ADP receptor signalization pathway, (It can also be used for monitoring clopidogrel therapy.)
8. Development of new method for testing the thromboxane A2 production pathway.
9. Description of a variant Glanzmann thrombasthenia caused by a novel mutation (p.Arg724Stop) in the platelet glycoprotein IIIa gene. The mutation tleads to a protein truncated in the cytoplasmic domain. Prenatal diagnosis of the mutation.
10. Construction of a new algorithm for the diagnosis of antithrombin (AT) deficiencies.
11. Demonstration of the superiority of anti-FXa assay over anti-FIIa assay in detecting AT deficiency caused by heparin binding site defect.
Kovács B, Bereczky Z., Oláh Z, Gindele R., Kerényi A., Gindele R., Selmeczi A., Boda Z., Muszbek L.: The superiority of anti-FXa assay over anti-FIIa assay in detecting heparin binding site antithrombin deficiency, Am J Clin Pathol; Accepted, 2013
Bagoly Z., Sarkady F., Magyar T., Kappelmayer J., Pongrácz E., Csiba L., Muszbek L.: Comparison of a new P2Y12 receptor specific platelet aggregation test with other laboratory methods in stroke patients on Clopidogrel monotherapy, Plos One; Accepted, 2013
Katona E., Muszbek L., Devreese K., Kovács K., Bereczky Z., Jonker M., Shemirani A.H., Ermens A. ,: Factor XIII deficiency: complete phenotypic characterization of two cases with novel causative mutations, Haemophilia - Submitted, 2013
