Módosított mátrixok fejlesztése és alkalmazása kapilláris elektrokromatográf-tömegspektrométer analitikai rendszerben
zsűri
Kémia 1
Kutatóhely
Orvosi Vegytani Intézet (Szegedi Tudományegyetem)
résztvevők
Hetényi Csaba
projekt kezdete
2001-01-01
projekt vége
2005-12-31
aktuális összeg (MFt)
2.702
FTE (kutatóév egyenérték)
0.00
állapot
lezárult projekt
Zárójelentés
kutatási eredmények (magyarul)
A munka első részében egy új típusú kapilláris elektrokromatográf/tömegspektrométer (CEC/MS) ún. segédfolyadék nélküli (sheathless) interfészt építettünk meg. Az eszköz a tömegspektrométerek nanoelektroszpré (nanoESI) ionforrásaihoz széleskörően használt kihúzott végű aranyozott boroszilikát kapilláris és CE rendszerhez használt kvarc kapilláris kombinálásán alapszik, így a sérülékeny hegy bármikor cserélhető anélkül, hogy a munkaigényesen elkészíthető CEC oszlopot elveszítenénk. Az intefész érzékenysége megfelel a nanoESI érzékenységének és rendkívül kis térfogatú mintából (néhány nanoliter) is képes analízist végezni.
A rendszert sikerrel alkalmaztuk olyan sok arginint tartalmazó peptidek gyors (2-3 perc analízisidő kb. ötöde HPLC-s mérésnek) mérésére ahol a közvetlen tömegspektrometriás mérést a trifluoracetát ionnal (TFA) történő erős ionpárképző hatás akadályozza.
Peptidek tandem tömegspektrometriás (MS/MS) szekvenálásának egyszerűbbé tételére származékképzésen alapuló CEC/MS/MS módszert dolgoztunk ki. Az állandó pozitív töltést és brómot tartalmazó szubsztituensek bevitelével sikerült növelni a detektálás érzékenységét valamint a Br izotópeloszlása miatt könnyebben értelmezhetővé váltak az MS/MS fragmensek, mindezt a kapilláris-HPLC-hez képest rövidebb analízisidővel. A módszer segítségével elkülöníthetőek a lizin és az arginin végű, valamint felismerhetőek a ciszteint és a tirozint tartalmazó peptidek, ezzel segítve a adatbázison alapuló fehérjeazonosítást.
kutatási eredmények (angolul)
A simple design of a sheathless CEC/MS interface was constructed and used for the separation of peptides by combining the widely used nanospray gold-coated borosilicate tips and the separation capillary. The nanospray needle fabricated in our laboratory can be used for several runs. A fast capillary electrochromatographic method was also developed for MS analysis of peptides containing numerous basic amino acids. This interface permits analysis of extreme low sample quantities (a few nanoliters) as well.
Tandem mass spectra (MS/MS) is commonly used to determine the sequence of peptides.
Charged derivatives was developed to simplify and to direct the fragmentation to form only N or only C-terminus ions to facilitate interpretation of their mass spectra.
In our work a simple and fast CE/MS/MS method is presented for the study of the labeling reaction with 2,5-dibromo-N-ethyl-thiazolium and 2,5-dibromo-N-ethyl-pyridinium salt.
Introduction of a bromine atom further improves the interpretation of the MS/MS spectra by doubling the peaks which reduces the complexity of the spectra hence it helps to interpret them. The method also permits of distinguishing the Arg, Lys, Tyr and Cys containing residues.
Kele,Z.; Ferenc,G.; Klement,T.; Toth,G.K.; Janaky,T.: Design and performance of a sheathless capillary electrophoresis/mass spectrometry interface by combining fused-silica capillaries with gold-coated nanoelectrospray tips, Rapid Communications in Mass Spectrometry, 2005
Zoltán Szilágyi, Zoltán Kele, Éva Klement: Analysis of wine anthocyanins: a comparison of HPLC_MS and CE_MS, Informal Meeting in Mass Spectrometry konferenciakiadvány, 2002
Zoltán Kele, Éva Klement, Tamás Janáky: The nanoelectrospray capillary as a CE-MS interface, Informal Meeting in Mass Spectrometry konferenciakiadvány, 2002
Zoltán Kele, Györgyi Ferenc, Petra Pádár, Gábor K. Tóth and Lajos Kovács: CE-MS analysis of bromo-containing derivatives of peptides, Informal Meeting in Mass Spectrometry konferenciakiadvány, 2005
