Enzimspecifitás megváltoztatása in vitro evolúciós stratégiával
Angol cím
Alteration of enzyme specificity by a strategy based on in vitro evolution
zsűri
Genetika, Genomika, Bioinformatika és Rendszerbiológia
Kutatóhely
Biokémiai Intézet (HUN-REN Szegedi Biológiai Kutatóközpont)
résztvevők
Tímár Edit
projekt kezdete
2005-01-01
projekt vége
2006-12-31
aktuális összeg (MFt)
4.750
FTE (kutatóév egyenérték)
3.00
állapot
lezárult projekt
Zárójelentés
kutatási eredmények (magyarul)
A kutatás célja előző – hasonló című – pályázatunk, amelyben is vitro mesterséges evolúcióval előállítottunk egy megváltozott specifitású DNS-modifikációs metiláz enzimet, kiegészítése és lezárása volt. Elért eredményeink a következőkben foglalhatók össze:
1. Előállítottuk és részlegesen jellemeztük két újabb, szintén megváltozott specifitású mutánsát a korábban vizsgált M.SinI enzimnek.
2. Előállítottuk és részlegesen jellemeztük az M.SinI enzimnek és egyik megváltozott specifitású mutánsának az N-terminális régió első 65 aminosavától megfosztott, rövidített változatát, amelyek működőképesek voltak.
3. Újszerű, az irodalomban egyedülálló, kisérleti rendszert dolgoztunk ki az M.SinI enzim kívánt irányú specifitásváltozásának in vivo detektálására és jellemzésére.
kutatási eredmények (angolul)
This was the extension and continuation of the work done during our previous OTKA project (with the same title), in which we constructed, by using in vitro directed evolution techniques, a mutant DNA-modification enzyme with changed recognition specificity.
The results of the present work could be summarized as follows:
1. By applying the same methods, we constructed two different new mutant variants of the previously studied M.SinI enzyme, with similarly changed recognition specificities, and partially characterized them.
2. We constructed and partially characterized truncated versions of the wild-type and one mutant variant of the M.SinI enzyme, without the N-terminal first 65 amino acids. These truncated enzymes preserved their enzymatic activity.
3. We developed an entirely new experimental system, for the in vivo detection and semiquantitative measurement of the changed recognition specificity of the studied M.SinI enzyme.
