Virus isolation and detection from wild rodent species, research of a TBEV focus.  Page description

Help  Print 
Back »

 

Details of project

 
Identifier
103937
Type K
Principal investigator Egyed, László
Title in Hungarian Vírus izolálási, kimutatási vizsgálatok vadon élő rágcsáló fajokból, és kullancsencefalitisz góckutatás.
Title in English Virus isolation and detection from wild rodent species, research of a TBEV focus.
Keywords in Hungarian vadon élő rágcsálók, vírus kimutatás, kullancsencefalitisz góckutatás.
Keywords in English Wild rodent species, virus detection, study of a TBEV focus
Discipline
Epidemiology, veterinary microbiology (Council of Complex Environmental Sciences)70 %
Public health, health services, environmental and occupational medicine, epidemiology, medical ethics (Council of Medical and Biological Sciences)30 %
Ortelius classification: Epidemiology
Panel Plant and animal breeding
Department or equivalent Institute for Veterinary Medical Research (Centre for Agricultural Research)
Participants Ferenczi, Emőke
Zöldi, Viktor
Starting date 2013-02-01
Closing date 2018-01-31
Funding (in million HUF) 19.002
FTE (full time equivalent) 7.80
state closed project
Summary in Hungarian
A kutatás összefoglalója, célkitűzései szakemberek számára
Itt írja le a kutatás fő célkitűzéseit a témában jártas szakember számára.

Kullancsencefalitisz góckutatás.
Célok: Négy éven át havi kiszállásokkal terepmunkával egy természetes KE góc kullancsainak, rágcsálóinak, időjárási körülményeinek vadállományának vizsgálata.
Egy jelenleg folyó, az OTKA által finanszírozott kutatási program során azonosítani tudtunk egy kullancsencefalitisz gócot, egy 10x10 méteres területre lokalizáltuk, izoláltuk a vírust. Két éve a kullancsokat és a helyi rágcsálók vérsavómintáit gyűjtjük (élvecsapdázás-elengedés). Egy természetes KE góc tanulmányozása a világon páratlan lehetőség, az itt folyó munkát szeretnénk folytatni, minél több évi munka eredménye állna rendelkezésre, eredményeink annál megbízhatóbbak, és értékesebbek lennének.

Rágcsálóvírus izolálás-kimutatás.
Célok: Vírus izolálási próbálkozás rágcsáló sejtvonalakon (5-10) 5-6 védelem alatt nem álló kisrágcsálófaj több tucat egyedéből/év. Az izolálásra felhasznált szövetekből vírus kimutatást is tervezünk pan-PCR rendszerekkel a fontosabb víruscsaládok tagjainak kimutatására (adeno, herpes,astro, picorna calici etc.).
Az elmúlt években világszerte nagyobb figyelem terelődött a kisrágcsálók vírusainak felfedezésére, bár e munkák nagy része (csak) PCR kimutatás, ami a vírussal való későbbi részletes munkát nem teszi lehetővé. Tervezett munkánkkal szeretnénk egyesíteni az elmúlt években a szövettenyésztésben, és élő rágcsáló befogásban szerzett gyakorlatunkat a nemzetközi tudományos trendekkel. Egyetlen előzetes ezirányú PCR vizsgálatunkkal 1 hónap alatt befogott állatokból, 1 új Picorna, 2 Astro, 2 Calicivírus genomját sikerült kimutatni. Mindez jelzi, hogy a környezetünkben élő kisrágcsáló fajok általános virológiai felmérése tudományos aranybánya lehet.

Mi a kutatás alapkérdése?
Ebben a részben írja le röviden, hogy mi a kutatás segítségével megválaszolni kívánt probléma, mi a kutatás kiinduló hipotézise, milyen kérdéseket válaszolnak meg a kísérletek.

Alapkérdések:
1., Hogy működik egy természetes KEV góc?
2., Milyen vírusokat hordoznak a környezetünkben élő kisrágcsáló fajok?

Az alapkérdések mellett több kérdéssel lehet megvilágítani munkánk célját:

KEV góckutatás:
Mikor, mely faj és hány kullancs fertőzőtt a góc területén? A vírusfertőzés mennyiben mutatkozik meg a rágcsálók ellenanyag válaszában? Milyen szerepet játszik az időjárás, és a nagyemlősök (vaddisznó, szarvas, őz) a vírusciklus működésében? Mekkora egy KE góc? Állandó, stabil, vagy mozog? Egy vagy több vírustörzs cirkulál a gócban? E vírustörzsek konzervatívak, vagy változékonyak? A virusgenom mely része stabil, és mely rész változékony?

Rágcsálóvírus izolálás-kimutatás.
Egyáltalán lehet bármilyen vírust izolálni, illetve kimutatni? Mely családokba tartoznak az izolált vírusok? Mely fajból, földrajzi tájról, szövetből származnak az izolált törzsek? Van köztük emberre, vagy a haszonállat állományra veszélyes kórokozók? Az izolált új vírusok összehasonlítása már ismert rokon vírusokkal hoz-e valamilyen új tudományos eredményt? Az új izolátumok megfertőzik-e a kisrágcsálókat, kiváltanak-e klinikai tüneteket, és ürülnek-e belőlük?

Mi a kutatás jelentősége?
Röviden írja le, milyen új perspektívát nyitnak az alapkutatásban az elért eredmények, milyen társadalmi hasznosíthatóságnak teremtik meg a tudományos alapját. Mutassa be, hogy a megpályázott kutatási területen lévő hazai és a nemzetközi versenytársaihoz képest melyek az egyediségei és erősségei a pályázatának!

KEV góckutatás
Az ilyen vizsgálatok teremthetik meg a lehetőségét annak, hogy csökkentsük az emberi KEV fertőzések gyakoriságát, és hogy kiírthassuk a felismert KE gócokat. Mindmáig sehol senki sem talált, és kutatott még egy természetes KE gócot, ugyhogy bármilyen e munkából nyert eredmény érdekes adat lesz az e területen dolgozó kutatók számára.

Rágcsálóvírus izolálás-kimutatás.
Hazánk minden sarkában élnek rágcsálók. nagy egyedszámuk, sűrűségük gyors generációs rátájuk megteremti a lehetőséget vírusaik felgyorsult evolúciójához, magas mutációs ráta, sok genomvariáns kialakulásához és fentmaradásához. Jobban ismernünk kellene a rágcsálók által fenntartott vírusokat, hogy sikeres intézkedéseket hozhassunk emberi és állategészségügyi járványok megelőzésére, és hogy megteremthessük a lehetőséget e rágcsálóvírusokkal való tartós együttélésre.

A kutatás összefoglalója, célkitűzései laikusok számára
Ebben a fejezetben írja le a kutatás fő célkitűzéseit alapműveltséggel rendelkező laikusok számára. Ez az összefoglaló a döntéshozók, a média, illetve az érdeklődők tájékoztatása szempontjából különösen fontos az NKFI Hivatal számára.

Kullancsencefalitisz góckutatás:
A kullancsencefalitisz Európa egyik legfontosabb állatról emberre terjedő kullancs közvetítette betegsége. A vírus a kullancsok és a helyi kisrágcsálók (egerek, pockok) segítségével él túl, marad fent. Mivel a kullancs kiírthatatlan (a kisrágcsálók is csak gyéríthetőek) a környezetből, folyamatosan számolni kell a betegség fennmaradásával, terjedésével. A világon páratlan módon sikerült Magyarországon egy kullancsencefalitisz gócot azonosítanunk. Az OTKA által támogatott programmal 2 éve vizsgáljuk a területet. Sikerült a vírustörzset izolálnunk, és a góc területét egy nagyon kicsi 80-100 nm2 területre szűkítenünk. Ezt a munkát szeretnénk a jelenlegi pályázattal folytatni, hogy megérthessük, hogy is működik a természetben ez a kullancs-rágcsáló-vírus rendszer. Ez lenne az alapja az emberi fertőzéseket megelőző hatékony járványügyi lépések megtételének is.

Rágcsáló vírus izlálás:
A kisrágcsálók az ország egész területét belakják, az emberi lakóhelyeket is, nagy egyedszámuk miatt gyakorlatilag kiírthatatlanok egy adott területről. Keveset tudunk az általuk hordozott, terjesztett vírusokról. E mikroorganizmusok kimutatása, vizsgálata, külföldön is csak az elmúlt években indult meg komolyabb keretek között. Eddigi rágcsáló gyűjtési, kezelési, szövettenyésztési tapasztalatainkra alapozva megpróbálnánk a hazai kisrágcsáló fajok (5-6 faj) virológiai felmérését elvégezni. Kimutatandó, hogy ezek a fajok hordoznak-e és milyen háziállatainkra és az emberre nézve veszélyes vírusokat? Ennek ismeretében lehetne állattartó telepeinket és az emberi lakóhelyeket is hatékonyabban védeni e vírusfertőzésektől és az azokat terjesztő rágcsálófajoktól.
Summary
Summary of the research and its aims for experts
Describe the major aims of the research for experts.

TBEV focuse study.
Aims: Monthly study of climate, ticks, rodents of a TBEV focuse for 4 years.
During our ongoing 3-year-long field study we could identify a tick-borne encephalitis focuse, localize it on a 10m x 10m territory and isolate a virus strain. Over the last two years, we collect ticks monthly and blood sera from rodents captured by live-trapped and release method. Direct study of a living TBEV focuse is a unique opportunity in the world. We would like to continue this promising field study to gain more results about natural behaviour of a zoonotic virus.

Rodent virus isolation, detection:
Aims: Virus isolation attempts on rodent cell lines from dozens of individuals/year from 6-7 rodent species not under protection. PCR analysis of the same tissues is planned for the detection of major families of viruses, such adeno, herpes, picorna, astro, caliciviridae.
These years identification of novel viruses is an upcoming popular field of virology, although unfortunately in most cases identification means only PCR detection. which makes further detailed studies and experiments impossible. With the planned series of examinations we would like to combine the experience we have gained over the last years in capturing and handling wild rodents and long years of practice in tissue culturing of our lab with novel international scientific trends. Our only preliminary study in this field resulted in detection 1 novel picorna virus, 2 calicivirus, and 2 astrovirus from faecal samples of some of the rodents we captured in one day of field work. These results indicates that virological survey of free ranging rodent species is a promising „scientific gold mine”.

What is the major research question?
Describe here briefly the problem to be solved by the research, the starting hypothesis, and the questions addressed by the experiments.

Main questions:
1., How a natural TBEV focuse works, lives?
2., What kind of viruses are carried and spread by small rodent species living in our close proximity?

Beyond the main questions several other questions need to be answered:

TBEV focuse study:
When, which species and how many ticks of the region are virus infected? How viral infection reflects in serological response of the rodents? Do climate, and presence of large mammals play any role in the virus circle? What is the size of a TBEV focus? Constant, fixed or moves? One or more virus strain(s) circulate(s) in the focuse? Are they/Is it stabile or changes? Which parts of the genome tend to be variable or conservative?

Rodent virus isolation-detection.
Is isolation, or PCR detection of any virus possible? Which virus families the isolates belong to? Which species, geographical area, or tissues the viruses originate from? Are any strains among the isolates dangerous for human or lifestock populations? Comparison of the novel isolates with closely related already known viruses add something new to our knowledge? Is the new isolates able to infect the rodents, provoke clinical signs, and shed by excretes?

What is the significance of the research?
Describe the new perspectives opened by the results achieved, including the scientific basics of potential societal applications. Please describe the unique strengths of your proposal in comparison to your domestic and international competitors in the given field.

TBEV focuse study.
Such examinations might create the possibility to impose novel measures in order to decrease the frequency of human TBEV infections, and to eradicate TBEV focuses. For the time being never and nowhere could anybody study directly a natural TBEV focus, so any result from such a work would be new, interesting data for the researchers of this scientific field.

Rodent virus isolation, detection: There is not a small piece of land without rodents in this country. Their large number, high individual density, fast generation time create the possibility for these rodent viruses for an accelerated evolution, existence and spread of lot of genetic variants, with high mutation rates.. We should know better the viruses maintained by rodents, in order to impose successful preventive measures against possible human and livestock epidemics, and to be able for long-lasting co-existence with these rodent viruses.

Summary and aims of the research for the public
Describe here the major aims of the research for an audience with average background information. This summary is especially important for NRDI Office in order to inform decision-makers, media, and others.

Tick-borne encephalitis (TBEV) focuse study:
TBE is one of the most important tick transmitted zoonotic (spread from animal to humans) disease in Europe. The virus survives and spread in a circle of ticks and small rodents (mice, voles). Since neither ticks nor small rodents are possible to eradicate from a certain territory, we should consider constant presence of the disease on all lands with abundant tick and rodent populations.
In the previous two years in a project financed by OTKA we could identify a natural TBEV focuse. This opportunity unique in the world, we could isolate a local virus strain, and the focuse with infected ticks were localized to a small, 80-100 nm2 territory. We intend to continue this work with this application in order to know better how this tick-rodent-virus system works and lives. The more year we could study this focuse, more reliable and correct the results will be. Such data could be the base of establishing epidemiological steps to prevent human TBEV infections.

Isolation and detection of novel rodent viruses.
Rodent species live in all parts of the country, their dense populations, fast replication circle promote evolution of viral variants. We know little about viruses carried and spread by these species. On the base of our experience we gained over the last years in rodent trapping, handling, in cell culture work we would run a virological survey on at least 5-6 rodent species, to detect whether these species carry viruses, which are dangerous to humans or livestock? We must know these viruses before taking effective measures to defend our animal farms and human residential areas from these infections.





 

Final report

 
Results in Hungarian
Egy KEV természeti góc többéves vizsgálatával az irodalomban először vizsgáltuk egy góc főbb tulajdonságait (méret, kullancs, rágcsálószám alakulása, szeropozitív gazdák, fertőzött kullancsok száma), környezet (hőmérséklet, csapadék, pára, nagyvadak) hatása a góc működésére. Ezek a vírus irodalmában előzmény nélküli eredmények. Négy vírustörzset izoláltunk, amelyeket szekvenálva az európai törzsek törzsfájára illesztettünk, érdekes eredményeket nyerve azt találtuk, hogy törzseink észak európai finn és orosz törzsekkel mutatnak rokonságot. Bizonyítottuk az erdei pocok kiemelt szerepét a kullancsok fenttartásában, terjesztésében. Kimutattuk, hogy egy rezisztens fajban, a pirókegérben is kialakul megfelelő fertőzési körülmények között spontán gyógyuló, szubklinikai encefalitisz. Kullancs magatartási vizsgálatokkal meghatároztuk a kullancsok által vészívásra használt fő testtájakat, az adatokat statisztikailag elemezve nyertünk új képet a kullancsok vérszívási szokásairól, valamint meghatároztuk a kullancsok gazdapreferenciáját, azaz mely fajt választják, ha tehetik. Érdekes módon kiemelkedően a háziegér, és a pirókegér bizonyult számukra a gazda- vérforrás szerepre a legalkalmasabbnak.
Results in English
During a some-year-long study of a natural tick.borne encephalitis focus we could first study the basic features (size, tick/host numbers, seropositivity of hosts, number of infected ticks) of a natural TBEV focus and effect of evironmental factors (precipitation, humidity, temperature, presence of large mammals) on it. These are unprecedented data in the literature of TBEV. Four virus strains were isolated and fully sequenced. Interestingly, on the phylogenetic tree our strains were closer to Finnish and Russian strains than to viruses of Central European origin. We proved, that bank vole plays outstanding role as blood-source of ticks especially for nymphs, and play a decisive role in maintaining and spreading tick populations. We could show that under certain conditions (large amount of infective viruses, per oral infective route) subclinical encephalitis develops in striped field mouse, a species considered resistant to TBEV infection. In the tick-behaviour field we studied the anatomical regions of hosts which are used for blood meal by ticks. We also determined the host species, ticks favour if they have chance to choose among host species. House mouse and striped field mouse were the species most frequently used for blood meal.
Full text https://www.otka-palyazat.hu/download.php?type=zarobeszamolo&projektid=103937
Decision
Yes





 

List of publications

 
Zöldi V., Papp, T, Rigó, Krisztina, Farkas, János, Egyed, László: A four-year-long study of an active natural tick-borne encephalitis focus in Hungary 2010-2013., Ecohealth, 2015(March)12(1):174-182, 2015
Zöldi,V., Papp, T., Reiczigel, J., Egyed L: Bank voles and adult rodents show high seropositivity rates in a natural TBEV focus in Hungary., Infectious diseases. Mar 2015, Vol. 47, No. 3: 178–181, 2015
Egyed, L., Rónai, Zs., Dán, Á: Hungarian tick-borne encephalitis viruses isolated from a 0.5-hectare focus are closely related to Finnish strains., Ticks and tick-borne diseases (accepted 2018 feb 26.), 2018
Egyed L. Zöldi V. Szeredi L.: Subclinical Tick-borne encephalitis virus encephalitis in experimentally infected Apodemus agrarius, Intervirology 58(6):369-372, 2016
Egyed L: Difference in susceptibility of small rodent host species to infestation by Ixodes ricinus larvae., Experimental and applied acarology 72(2):183-189., 2017




Back »