Új homogén folyadékkromatográfiás és elektrokromatográfiás töltetek kifejlesztése
Title in English
Development of New Homogeous Media for Liquid Chromatography and Electrochromatography
Panel
Chemistry 1
Department or equivalent
Department of Analitical Chemistry and Environmental Chemistry (University of Pécs)
Participants
Guttman, András Kiss, Ibolya Páger, Csilla
Starting date
2004-01-01
Closing date
2007-12-31
Funding (in million HUF)
2.250
FTE (full time equivalent)
0.00
state
closed project
Final report
Results in Hungarian
A szelektív kémiai rendszerek egyik nagy kihívása, hogy makromolekulákat és akár sejteket analitikai és preparatív módon felismerjen és elválasszon a befoglaló mátrixból. Az ún. imprinting technika csak kismolekulákra adott eddig lehetőséget. Munkánk során a szelektív gélek kifejlesztésével, tesztelésével, és kromatográfiás, valamint elektroforetikus elválasztások alapját biztosító új, homogén (monolit) töltetek kialakításával foglalkoztunk. A kifejlesztett gélek makromolekulák, különböző fehérjék és ennél nagyon biológiai rendszerek, pl. vírusok vagy baktériumok szelektív felismerésére, és megkötésére is alkalmasak. Az újonnan kifejlesztett töltetek alkalmasak kapilláris HPLC és akár miniatürizált elektrokromatográfiás készülékekben is szelektív elválasztásokra. A projekt során kimutattuk, hogy a szelektív gélek nagy érzékenységgel képesek felismerni ugyanazon fehérje különböző konformációs állapotait (vasat tartalmazó és nem tartalmazó transzferrinek), különböző fajtáktól származó, szerkezetileg hasonló fehérjéket (hemoglobinok). A munka eredményeként bebizonyítottuk, hogy a homogén gélek alkalmasak vírusok szelektív megkötésére olyan mértékben, hogy két virus (Semliki Forest Virus vad és mutáns formája) közötti, mindösszesen három aminosav-maradék különbséget is képesek felismerni. S végül bebizonyítottuk, hogy a szelektív gélek sejteket (különböző Gram-negatív baktériumokat) is képesek szelektíven megkötni.
Results in English
The selective chemical systems have the task to recognize and/or separate macromolecules or even cells from the matrix in analytical or preparative way. The imprinting technique, however, has not provided this opportunity, yet, but the selective recognition of small molecules only. This project included the testing, development and application of selective gels (artficial antibodies) for chromatographic and electrphoretic separations in the form of new, homogen (monolitic) beds. The selective gels are capable of recognizing and binding macromolecules, or larger macro-assemblies, such as viruses of bacteria. The new homogen gels can be used in capillary chromatography or in miniaturized electrochromatographic systems. The results show that with the use of these gels one can differentiate the different conformations of the same protein (e.g. iron-free or iron-contaning transferrin) and proteins with very similar structures (like hemoglobins from different species). We approved that the homogen gels are able to recognize viruses with very small differences (e.g. Semliki Forest Virus wild and mutant forms) differing only by three amino acid residues from each other. Finally we showed that the selective gel-technique is able to recognize cells with high specificity (e.g. differentiation of several Gram-negative bacteria).
Takátsy, A., Hodrea, J., Majdik, C., Irimie, F.D., Kilár, F.: Role of chemical structure in molecular recognition by transferrin, Journal of Molecular Recognition, 19: 270-274., 2006
Takátsy, A., Kilár, A., Kilár, F., Hjertén, S.: Universal Method for Synthesis of Artificial Gel Antibodies by the Imprinting Approach Combined with a Unique Electrophoresis Technique for Detection of Minute Structural Differences of Proteins, Viruses and Cells (Bacteria). Ia. Gel Antibodies against Proteins (Transferrins), Journal of Separation Science 29: 2802-2809, 2006
Rezeli, M., Kilár, F., Hjertén, S.: Monolithic beds of artificial gel antibodies, Journal of Chromatography A, 1109: 100-102., 2005
Bacskay, I., Takátsy, A., Végvári,Á., Elfwing, A., Ballagi-Pordány, A., Kilár, F., Hjertén, S.: Universal Method for Synthesis of Artificial Gel Antibodies by the Imprinting Approach Combined with a Unique Electrophoresis Technique for Detection of Minute Structural Differences of Proteins, Viruses and Cells (Bacteria). III. Gel antibodies against cells (bacteria), Electrophoresis 27: 4682-4687, 2006
Hjertén,S; Ghasemzadeh,N.; Hjertén,M.-C.; Végvári,Á.; Bacskay,I.; Kilár,A.; Rezeli,M.; Takátsy,A.; Kilár,F.: Universal method for synthesis of highly selective artificial gel antibodies against proteins, viruses and cells, Affinity 2005, Uppsala, Svédország, 2005
Takátsy, A., Sedzik, J., Kilár, F., Hjertén, S.: Universal Method for Synthesis of Artificial Gel Antibodies by the Imprinting Approach Combined with a Unique Electrophoresis Technique for Detection of Minute Structural Differences of Proteins, Viruses and Cells (Bacteria). II. Gel Antibodies against virus (Semliki Forest Virus), Journal of Separation Science 29: 2810-2815, 2006
