Hazánkban is egyre fontosabbá váló, de kevéssé művelt kutatási terület a halak vírusos betegségeinek vizsgálata. Tokfélékből izolált herpeszvírus genomjának szekvenálását és összehasonlító vizsgálatát tervezzük. Kórtani jelentőségük ellenére hal-herpeszvírusokból mindössze egyetlen teljes genom-szekvencia ismert, a csatornaharcsa (Ictalurus punctatus) herpeszvírusából. Más halfajokból (angolna, lazac, pisztráng) és béka-herpeszvírusból is csak részleges szekvenciák érhetők el. Ezek alapján a kétéltűek és halak herpeszvírusai önálló rendszertani egységet alkotnak, és nem sorolhatók a jelenleg hivatalosan elfogadott Herpesviridae család emlősökből, madarakból és hüllőkből izolált tagjaival közös taxonba. A halak és kétéltűek herpeszvírusainak diverzitására vonatkozóan azonban nincsenek ismereteink. Az USA egyik jelentős halgazdaságának kutatóival megkezdtük egy fehér tokból (Acipenser transmontanus) származó hal-herpeszvírus jellemzését. Előzetes eredményeink szerint az új vírus, ami vérteshalból az első izolátum, hasonló, de nem azonos a többi hal-herpeszvírussal. A tervezett pályázat keretében a genom teljes vagy minél nagyobb hányadának nukleotid sorrendjét meghatároznánk, és összehasonlító elemzést végeznénk más fajok herpeszvírusaival. A kutatások sikeres kivitelezése hozzá járulna diagnosztikai PCR módszerek kidolgozásához, illetve a hal-herpeszvírusok génkifejező vektorrá való fejlesztésének megalapozásához. Mód nyílna e vírusok esetleges európai vagy hazai előfordulásának és kórokozó szerepének vizsgálatára. Várhatóan a herpeszvírusok rendszertanának gyökeres reformjához is fontos adatokat szolgáltatnánk.
angol összefoglaló
Viral infections and virus-induced diseases represent a yet not intensively cultivated research field of growing significance in Hungary. We plan to perform the genome sequencing and comparative analysis of a herpesvirus isolated from white sturgeon (Acipenser transmontanus). In spite of their pathological importance, only one complete genome sequence of herpesvirus from fish has been released in public databases, that of the channel catfish (Ictalurus punctatus) herpesvirus. From other fish hosts (eel, salmon or trout) and from a frog herpesvirus, only partial DNA sequences are available. Based on these data, the herpesviruses of fishes and amphibians form an independent taxonomic unit, and can't be classified into the presently official Herpesviridae family together with herpesviruses of mammals, birds or reptiles. The extent of diversity of herpesviruses of fishes and amphibians is unknown. We have initiated the characterisation of an acipenserid herpesvirus in collaboration with researchers of an important American fish farm. Based on preliminary results, the new virus, the first isolate form a chondrostei species, is similar but not identical with other fish herpesviruses. In the present project, we intend to determine a large portion, or preferably the complete sequence, of the virus genome. A comparative analysis with other fish herpesviruses is also planned. Successful performance of the experiments would provide a sound basis for the elaboration of diagnostic PCR methods, and for the development of gene expression tools from herpesviruses. It would make possible to survey the occurrence or pathological role of these viruses in Europe and Hungary. Theoretical significance of our studies would be the contribution to the radical reform of the herpesvirus taxonomy.
Zárójelentés
kutatási eredmények (magyarul)
A fehér tok-herpeszvírus (AciHV-2) genomjának középső szakaszát sikerült molekuláris klónozással és PCR-rel felerősíteni és DNS szekvenciáját megállapítani 68.700 bp hosszban (a feltételezett genomnak több mint az 50%-a). Ez 44 gén/ORF teljes és 3 gén részleges szekvenciája. Az ORF-ek nagy többsége méretében, irányultságában és lokalizációjába megegyezik vagy hasonló a foltos csatornaharcsa-herpeszvírus (IcHV-1) megfelelő ORF-jeivel. A különbségek: az IcHV-1 szerinti ORF 24 és 25 között egy plusz gént találtunk, amely feltehetően egy szerin-proteáz; az ORF 65-nek megfelelő gén hossza jelentősen nagyobb, mint az IcHV-1-ben. Olasz fekete törpeharcsából (Ameiurus melas) izolált herpeszvírusból mintegy 10.000 bázispár hosszú szakaszt erősítettünk fel PCR-rel és szekvenáltunk. A genom-szerveződés nagyfokú hasonlóságot mutat az IcHV-1-gyel. Szibériai tok-herpeszvírus genomból 11.000 bázispárt szekvenáltunk. E vírus nagyon közeli rokonságban áll az észak-amerikai izolátumunkkal. A talált filogenetikai rokonságok alapján tett vírustaxonómiai javaslatainkat részben elfogadta a Nemzetközi Vírustaxonómiai Bizottság. Ezüstkárászból elsőként mutattunk ki eddig csak aranyhalakból leírt Cyprinid herpesvirus 2-t. Hazánkban először mutattunk ki PCR-rel a pontyhimlő vírusát (CyHV-1). Összehasonlító célból eddig ismeretlen herpeszvírusokat mutattunk ki és jellemeztünk denevérekből, ázsiai kiskarmú vidrából, majmokból, egerészölyvből, melyek a Herpesviridae mindhárom alcsaládját képviselték.
kutatási eredmények (angolul)
The central part of the genome of white sturgeon herpesvirus (AciHV-2) was molecularly cloned or PCR amplified, DNA sequenced in 68,700 bp-length (more than 50% of the supposed genome length). This covers 44 full and 3 partial genes/ORFs. Most of the ORFs are identical with or similar to the corresponding ORFs of channel catfish herpesvirus (IcHV-1) in their size, orientation and localization. The differences: a plus gene between ORF 24 és 25 (IcHV-1 numbering) which is supposedly a serine protease; and the size of the ORF 65 homologue is considerably larger than in IcHV-1. An about 10,000 bp long genome fragment was amplified and sequenced from a herpesvirus isolated from black bullhead (Ameiurus melas). The genome organization showed high level similarity with that of IcHV-1. 11.000 bp was sequenced from the genome of a Siberian sturgeon herpesvirus. This virus is a close relative of our North American isolate. Our taxonomical proposal made on the basis of the identified phylogenetic relatedness has been partially accepted by the International Committee on Taxonomy of Viruses. We were first to detect cyprinid herpesvirus 2 in Silver Prussian carp which had been described earlier exclusively from goldfish. We detected carp pox virus (CyHV-1) by PCR first in Hungary. For comparative studies, we detected and characterized novel herpesviruses from bats, oriental small-clawed otter, monkeys, and buzzard, which represented all three subfamilies of Herpesviridae
Doszpoly A, Dán Á, Ursu K, Láng M., Paulus P, Csaba Gy: Az aranyhal vérképzőszervi elhalását okozó herpeszvírus (CyHV-2) fölbukkanása az ezüstkárászban (Carassius auratus Gibelio), Halászati Tudományos Tanácskozás (HAKI Napok), 2010
Benkő M: Állatkerti állatok virológiája, Molnár V, Sós E, Liptovszky M (szerk) Diagnosztika a vadállatorvoslásban, Magyar Vad- és Állatkerti Állatorvosok Társasága, Fővárosi Állat- és Növénykert. Bpest, pp 60-62, 2007
Jánoska M, Molnár V, Harrach B: Detection of novel herpesviruses in wild mammals, XIV. International Congress of Virology, Istanbul, Törökország, aug. 10-15, p. 385, 2008
Doszpoly A, Benkő M, Bovo G, LaPatra SE, Harrach B: Comparative analysis of a conserved gene block from the genome of the members of the genus Ictalurivirus, benyújtva, 2010
Jánoska M, Vidovszky M, Molnár V, Liptovszky M, Harrach B, Benkő M: Novel adenoviruses and herpesviruses detected in bats in Hungary, javított változatban visszaküldve az újságnak, 2010
Dandár E, Szabó L, Heltai M, Doszpoly A: Adenovírusok és herpeszvírusok előfordulásának felmérése emlős ragadozók (Carnivora) mintáinak PCR-es vizsgálatával: borz-herpeszvírus első kimutatása Magyarországon, Magyar Állatorvosok Lapja 132 (5) 302-308, 2010
